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研磨仪与疏散仪在卵白表达水平检测方面的应用

宣布时间:2024-11-01 来源:太阳娱场城官网入口 浏览量:0
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实验目的

  为了解大鼠肺组织中炎症因子卵白表达情况,需要将组织内的卵白尽量释放并收集,使用研磨和超声手段,对肺组织进行匀浆和细胞破碎,最终疏散获得溶液中的卵白进行WB实验,从而了解卵白表达情况。

实验步骤

  取0.2 g大鼠右肺组织样本,切碎,取适量溶解并混匀后的RIPA裂解液,使用前加入酶抑制剂,在每100 mg右肺组织样本内加入 1 mL 的RIPA裂解液,后使用SCIENTZ-24高通量组织研磨器将组织充实研磨匀浆,于4℃的条件下裂解 30~60 min,将裂解后的组织置于SCIENTZ-1500F超声疏散仪上破碎,用高速离心机10000 r/min 离心10 min,取上清液。提取总卵白并利用BCA试剂盒测定总卵白浓度,于100℃水中煮5 min,使卵白变性后,置于冰上使其骤冷,提取为实验使用的卵白样本,置于-20℃冰箱中冷冻生存。使用蒸馏水清洗洁净灌胶玻璃板,竖直放置使其自然晾干。划分使用疏散胶、5%浓缩胶处置惩罚后,将凝胶置于电泳槽进行电泳,电泳结束后将卵白转移到预先准备的 NC 膜上,制备转膜“三明治”,在电转仪中转膜结束后,摇床洗膜,关闭液关闭1~2 h倒掉关闭液,加入稀释的相应抗体。在摇床上4℃ 留宿,TBS-T洗膜3次,每次10 min,加入二抗。二抗孵育结束后,于摇床上用TBST洗膜5~10 min ×3次。加ECL事情液于印迹膜上30~60 s,吸干发光液,置印迹膜于成像分析仪自动成像,软件ImageJ分析卵白条带灰度值。

实验结果

  各组大鼠肺组织中IL-17、IL-22、IL-10、IL-35卵白表达情况比力与空白组比力,模型组和假 贴组肺组织中 IL-17、IL-22卵白相对表达量均明显升高(P均<0.05),IL-10、IL-35卵白相对表 达量均明显降低(P均<0.05) ; 与模型组和假贴组比力,地塞米松组、发酵组、非发酵组肺组织中IL-17、IL-22卵白相对表达量均明显降低(P均<0. 05),IL-10、IL-35卵白相对表达量均明显升高( P均<0.05) ; 地塞米松组、发酵组、非发酵组间各指标比力差异均无统计学意义( P均>0.05)。

实验结果

实验结果

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